Variation in sister chromatid exchange frequencies and cell-cycle kinetics between human whole blood and plasma leukocyte cultures

Os efeitos da concentraçäo de bromodeoxiuridine (BUdR) e o comprimento do período de síntese (S) na freqüência basal de intercâmbios de cromátides irmäs (SCEs)e na taxa de proliferaçäo de culturas de sangue total (WBC) e de leucócitos plasmáticos (PLC) humanos foram estudados. Um método imunofluorescente foi usado para induzir a diferenciaçäo de cromátides irmäs. Este método emprega uma baixa concentraçäo de BUdR para a marcaçäo de cromossomos durante o primeiro ciclo celular in vitro (3,3µM), e o anticorpo monoclonal anti-BUdR conjugado com fluoresceína isotiocianada (FITC) para detecçäo. Permitiu-se que WBC e PLC crescessem durante o primeiro ciclo celular (48h) na presença de BUdR; o meio de cultura foi entäo substituído pelo meio de cultura sem BUdR e as células foram cultivadas por um ciclo celular adicional (24h) até a colheita (72h). Os cromossomos foram contrastados com iodeto de propidium DAPI. PLC mostrou no mínimo um aumento em dobro na freqüência de SCE sobre os valores de WBC e a paralela, independente da concentraçäo de BUdR no meio de cultura, pelo menos na faixa do análogo de base empregada (3,3µM-33,0µM). Além disso, uma estimativa do comprimento do período S, feita pela análise da proporçäo de diferentes tempos de colheira, revelou que PLC tem um período S marcadamente extenso, comparado a WBC. Conseqüentemente, a taxa de deslocamento de fork do DNA de linfócitos em PLC poderia ser mais lenta que em WBC, resultando em um aumento na freqüência de SCE destas culturas.

Decreased proportion of B cells in lectin-stimulated lymphocyte cultures from patients with Pallister-Killian syndrome

Estudou-se a resposta de linfócitos de pacientes com síndrome de Pallister-Killian a lecitinas. Linfócitos sangüíneos foram cultivados na presença de fitohemaglutinina ou mitógeno de "pokeweed" durante 96h. As células foram identificadas usando a técnica MAC (morfologia, anticorpo, cromossomo), que permite a identificaçäo tanto de células mitóticas como as näo proliferantes em populaçöes näo fracionadas de linfócitos. A proporçäo de células B (CD20/22+) e T (CD3+) no início da cultura foi igual nas amostras controle e da síndrome de Pallister-Killian. Depois da cultura, a proporçäo de células CD20/22+ mitóticas e em interfase foi significativamente menor, e a de células CD3+ significativamente maior, em culturas da síndrome de Pallister-Killian de responder à estimulaçäo pela fitohemaglutinina ou pelo mitógeno de "pokeweed", ou por uma perda seletiva de células B durante a cultura in vitro.